bakteriellt endotoxintest

Bakteriellt endotoxintest är att bestämma om bakterieendotoxinet i testartikeln uppfyller kraven. Endotoxin är en lipopolysackarid i cellväggen hos gramnegativa bakterier, och dess toxiska komponent är lipid A. Bakterierna dog efter sönderfall. Bakteriell endotoxintestning innefattar två metoder, en gelmetod och en fotometrisk metod, den senare inkluderar en turbidimetrisk metod och en kromogen substratmetod. När du testar testet kan någon av metoderna användas för testet. När mätresultaten är kontroversiella, om inte annat anges, ska resultaten av gelmetoden råda. Grundläggande information Specialkategori: Inspektionskategori: Patogen mikrobiologisk undersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: fasta Analysresultat: Under normala: Normalt värde: ingen Över normal: negativt: Gelén förblir inte intakt och är negativ från rörets vägg. positivt: Positiva poster som inte gled från väggen var positiva. Tips: Bakteriellt endotoxintest är att bestämma om bakterieendotoxinet i testartikeln uppfyller kraven. Normalt värde Florans typ och andel av kroppen är normal och människokroppen är i en dynamisk balans. Klinisk betydelse Pyrogen är huvudsakligen ett endotoxin frisatt av bakterier Pyrogen kommer in i blodcirkulationssystemet i kroppen och orsakar en serie biverkningar såsom feber. Därför är injektionen pyrogen eller bakteriell endotoxintest ett viktigt kvalitetsindex för att säkerställa injektionssäkerheten. Onormalt resultat Kliniskt, när en stor mängd infusion ges intravenöst, har patienten symtom på frossa, hög feber, svettning, svimning, kräkningar inom 0,5 till 1 timme på grund av närvaron av pyrogener i läkemedelslösningen. Kroppstemperaturen kan nå 40 ° C under hög feber. De kan till och med chocka. Positivt resultat kan vara sjukdom: Bacillus licheniformis enteritis överväganden Vid upprättandet av testmetod för bakteriell endotoxin, vid beräkning av endotoxingräns L, MVD och MVC, är det nödvändigt att uppmärksamma viktiga parametrar såsom maximal människdos, produktspecifikationer, känslighet för sputumreagens etc., eftersom beräkningsfel kommer att leda till alla efterföljande ansträngningar. Alla misslyckades. Vanliga problem är: 1. Den kliniska dosen bestäms felaktigt. Endast den konventionella dosen används. Maximal möjlig dos och administreringsväg för människokroppen beaktas inte. I gränsvärdesformeln L = K / M, på grund av definitionen av K-värde och M-värde. Suddig gör tilldelningen av K- och M-värden felaktig, vilket i slutändan leder till felaktig beräkning av gränserna. Till exempel administreras en injektion av en klinisk vuxen 40 till 80 mg per intravenös infusion och ett spädbarn (tre månader eller mer) administreras intravenöst med 10 till 20 mg varje gång. Gränsen för dosen för den vuxna (kroppsvikt 60 kg) är 3,75EU / mg, medan spädbarnsvikten endast är cirka 5 kg, den beräknade gränsen är cirka 1,25EU / mg, om den maximala dosen per kilo kroppsvikt inte beaktas, bakterieendotoxingränsen Det kommer att bli en stor skillnad. 2. Bakterieendotoxingränsen för vissa deklarerade sorter beräknas inte baserat på den kliniska dosen, utan beräknas baserat på dosen av samma typ av pyrogentest, vilket resulterar i ett gränsfel. 3. Bakterieendotoxingränsen för vissa sorter kopierades från den främmande farmakopén, och skillnaden mellan den kliniska användningsdosen på den inhemska marknaden och vikten hos kineserna och utlänningarna beaktades inte, och gränsen bestämdes felaktigt. 4. Felaktig beräkning av den dagliga doseringsdosen (multipeldosering på en dag). 5. När sortspecifikationen (koncentrationen) ändras, justeras inte beräkningen MVD. 6. Den maximala dosen som ska användas för att fastställa metoden har överskridit den dos som användes i kliniken. Inspektionsprocess Först titerbestämningen Bakteriella endotoxinstandarder kalibreras som riktmärken för att bestämma den ekvivalenta styrkan hos basvikten. Titer per 1 mg arbetsstandard bör vara minst 2 EU, högst 50 EU och experimentella data med enhetlighet och stabilitet. Titern bestäms på följande sätt: Åtminstone 4 prover av varje sats av arbetsstandard används och samma sats sputumreagens och samma standard används. Varje arbetsstandard utspädes med endotoxintestvatten * beroende på vikt och standardprodukt. En serie av tvåfaldiga utspädningar av endotoxinlösning framställs och reageras med hydrazinreagens. När logaritmen för reaktionsändpunkten för de fyra arbetsstandarderna När standardavvikelsen (S) för medelvärdet är mindre än 0,365 beräknas det geometriska medelvärdet (i ng / mg) för reaktionsändpunkterna för de fyra arbetsstandarderna och reaktionsändpunkten (i EU / mg) för standarden. För det andra testförberedelse 1. De redskap som används i denna metod behandlas för att avlägsna eventuellt exogent endotoxin som kan finnas närvarande. Torr rostning vid 250 ° C i 30 minuter eller 180 ° C i 2 timmar kan också användas. Andra lämpliga metoder kan också användas. Testoperationen bör förhindra mikrobiell kontaminering. 2. Kontrollera känslighetsetikettvärdet för batchnummer 鲎 reagens före testet, vilket ska uppfylla kraven. Tillsätt mängden hydrazinreagenslösningsmedel. Efter upplösning är det en guanidinreagenslösning och är klar för användning. 3. Utspädning av testprovet: När känslighetsmarkeringsvärdet för batchnumret 鲎 reagens är mindre än den inre giftgränsen för testprovet, beräkna det med följande formel och använd endotoxintestvattnet * för att späda reagenset för inspektion. Utspädningsfaktor för testprovet = X / λ X: Endotoxin-begränsad endotoxin-gräns (EU / ml) λ: känslighetsvärde för testmedlet för testmedlet (EU / ml) För det tredje, kolla 4 × 75 mm provrör (eller 0,1 ml / set sputumreagens ursprunglig ampull) innehållande 0,1 ml sputumreagenslösning, varav 2 tillsätts med 0,1 ml för provröret, och 1 för 2 λ endotoxin-arbetsstandarden 0,1 ml användes som ett positivt kontrollrör och 0,1 ml av en sputumreagenslösning tillsattes som ett negativt kontrollrör. Efter försiktigt blandning av provrören stängdes röret och placerades vertikalt i ett vattenbad på 37 ± 1 ° C under 60 ± 2 minuter. Var försiktig när du håller i röret och tar röret för att undvika negativa resultat på grund av vibrationer. (4) Resultat av bedömning Röret avlägsnades försiktigt från vattenbadet och inverterades långsamt vid 1800. Gelen i röret deformerades inte. Det positiva slet inte från rörväggen. (+) Gelén kunde inte förbli intakt och var negativ från rörväggen. (a). Om provröret 2 är (1) ska det anses vara i överensstämmelse med bestämmelserna och testet av pyrogentest (kaninmetod) ska inte utföras. Om båda rören är (+) bör de anses inte uppfylla bestämmelserna. Till exempel är ett rör i 2 rör (+) och 1 rör (1). Enligt den beskrivna metoden testas 4 rör igen. Ett rör i 4 rör är (+), vilket innebär att det inte överensstämmer med bestämmelserna. Om inte annat anges i texten ska testartiklarna som uppfyller kraven testas med pyrogentestmetoden (kaninmetoden) och bedömas enligt resultaten. Gränsen för bakterieendotoxin i testartikeln ska vara i enlighet med bestämmelserna i respektive artiklar. Den positiva kontrollen var (1) eller den negativa kontrollen var (+), och testet var ineffektivt. Bifogning: Bakteriellt endotoxintest för sterilt vatten för injektion, vatten för injektion, natriumkloridinjektion, 5% och 10% glukosinjektion. Inte lämplig för publiken Generellt inga tabuer. Biverkningar och risker Generellt ingen skada.